使用奧林巴斯 CX33 顯微鏡進(jìn)行明場(chǎng)及偏光觀察中藥材粉末,以下是具體的方法和步驟:
明場(chǎng)觀察
前期準(zhǔn)備
顯微鏡放置與檢查:將顯微鏡放置在穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)上,稍向左傾斜,距平臺(tái)邊緣約 7 厘米。檢查各部件是否完好,目鏡、物鏡安裝是否正確。
選擇物鏡:根據(jù)中藥材粉末的特性和觀察需求,選擇合適的平場(chǎng)消色差物鏡,如 4X、10X、40X 或 100X 等。低倍物鏡(如 4X 或 10X)可用于觀察粉末的整體分布和大致形態(tài),高倍物鏡(如 40X 或 100X)則用于觀察粉末的細(xì)微結(jié)構(gòu)和特征。
樣品制備:取適量中藥材粉末,均勻地撒在載玻片上,滴加一滴蒸餾水或其他合適的介質(zhì)(如甘油),用鑷子或玻璃棒輕輕攪拌,使粉末充分分散,然后蓋上蓋玻片,制成臨時(shí)裝片。
觀察操作
調(diào)節(jié)光源:打開(kāi)顯微鏡的內(nèi)置 LED 光源,從較低亮度開(kāi)始調(diào)節(jié),逐步增加亮度,以獲得清晰且不會(huì)對(duì)眼睛造成刺激的觀察效果。
對(duì)焦與調(diào)整:將載玻片放在載物臺(tái)上,用夾具固定,通過(guò)低倍物鏡找到粉末樣品的圖像,并將其移至視野中心。旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器,換用高倍物鏡,此時(shí)視野可能會(huì)變暗,可選擇較大的孔徑并使用凹面反射鏡來(lái)增加亮度。調(diào)整精細(xì)聚焦螺旋,使圖像清晰。
優(yōu)化圖像:確保大光圈與燈孔對(duì)齊,旋轉(zhuǎn)反射器,使光線通過(guò)光孔反射到鏡筒中。通過(guò)目鏡觀察,再次調(diào)整焦距和光源亮度,還可根據(jù)物鏡放大倍率調(diào)整孔徑光闌,以獲得滿意的圖像對(duì)比度和清晰度。
觀察內(nèi)容與分析
形態(tài)特征:觀察中藥材粉末的形狀、大小、邊緣輪廓等,如淀粉??赡艹蕡A形、橢圓形或多角形,纖維可能呈長(zhǎng)條形,石細(xì)胞可能呈不規(guī)則形等。
顏色與紋理:注意粉末的顏色以及表面的紋理特征,有些粉末可能具有特殊的顏色或紋理,如黃連粉末呈黃色,具有細(xì)小的顆粒狀紋理。
細(xì)胞結(jié)構(gòu):觀察粉末中的細(xì)胞類型,如薄壁細(xì)胞、厚壁細(xì)胞、導(dǎo)管等,以及它們的排列方式和細(xì)胞壁的特征。
偏光觀察
準(zhǔn)備工作
安裝偏光附件:需要外接偏光附件,如起偏器和檢偏器。通常起偏器位于光源與樣品之間的光路中,檢偏器位于物鏡后孔徑與觀察筒或相機(jī)端口之間的光路中,將這些部件正確安裝到顯微鏡上。
校準(zhǔn)偏光系統(tǒng):插入起偏器和檢偏器,調(diào)整至正交偏光狀態(tài),即旋轉(zhuǎn)檢偏器,使視野中光線最暗,此時(shí)起偏器和檢偏器的偏振方向相互垂直。
觀察步驟
樣品放置與對(duì)焦:將制備好的中藥材粉末樣品裝片放置在載物臺(tái)上固定,按照明場(chǎng)觀察的方法進(jìn)行對(duì)焦,使樣品圖像清晰。
觀察與記錄:在正交偏光條件下,旋轉(zhuǎn)載物臺(tái) 360°,觀察中藥材粉末的光學(xué)特征。注意觀察粉末在不同角度下的亮度變化、顏色變化以及是否出現(xiàn)雙折射現(xiàn)象等。具有雙折射性質(zhì)的中藥材粉末在偏光下會(huì)呈現(xiàn)出明暗交替的現(xiàn)象,某些晶體可能還會(huì)顯示出特殊的干涉色。
觀察內(nèi)容與分析
雙折射現(xiàn)象:觀察粉末是否具有雙折射現(xiàn)象,以及雙折射的強(qiáng)度和特征。雙折射現(xiàn)象明顯的粉末,可能含有結(jié)晶性成分,如草酸鈣結(jié)晶、碳酸鈣結(jié)晶等。
晶體形態(tài)與取向:對(duì)于具有結(jié)晶結(jié)構(gòu)的中藥材粉末,觀察晶體的形態(tài),如方形、針形、柱形等,并通過(guò)旋轉(zhuǎn)載物臺(tái),分析晶體的取向分布,了解晶體在粉末中的排列方式。
鑒別與分類:根據(jù)偏光下觀察到的特征,結(jié)合中藥材的顯微鑒定圖譜和相關(guān)資料,對(duì)中藥材粉末進(jìn)行鑒別和分類,判斷其真?zhèn)魏图兌取?/p>
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