細胞高分辨率顯微黃光動態(tài)成像主要是利用特定的顯微鏡技術(shù),在黃色光波段下對細胞進行高分辨率的動態(tài)觀察,可清晰捕捉細胞的形態(tài)變化、生理活動等。在此基礎上,多實驗模塊分析則是從不同角度和層面,對成像結(jié)果進行深入研究,以獲取更多細胞相關信息。以下是具體介紹:
細胞高分辨率顯微黃光動態(tài)成像原理與實現(xiàn)
成像原理:通?;跓晒獬上窦夹g(shù),細胞內(nèi)的特定結(jié)構(gòu)或分子經(jīng)熒光染料標記,黃色光作為激發(fā)光,使熒光染料發(fā)出熒光,通過顯微鏡的光學系統(tǒng)收集熒光信號并成像。不同的熒光染料對黃色光的吸收和發(fā)射特性不同,可根據(jù)研究目的選擇合適的染料,從而特異性地觀察細胞內(nèi)的目標結(jié)構(gòu)或分子。
實現(xiàn)方式:需借助顯微鏡設備,如共聚焦激光掃描顯微鏡等。以奧林巴斯 FLUOVIEW FV3000 系列共聚焦激光掃描顯微鏡為例,其具有高靈敏度和速度,可實現(xiàn)多種成像模式。配合合適的黃色激光光源,以及高分辨率物鏡和探測器,能在黃色光激發(fā)下對細胞進行高分辨率動態(tài)成像,還可通過 TruFocus 裝置在活細胞成像過程中保持聚焦,減少溫度變化或添加試劑等因素對成像的影響。
多實驗模塊分析
細胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)分析模塊:通過對動態(tài)成像結(jié)果的觀察,可分析細胞形態(tài)變化,如細胞的生長、分裂、凋亡過程中的形態(tài)轉(zhuǎn)變。還能研究細胞內(nèi)細胞器的分布與動態(tài)變化,如線粒體的融合與分裂、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形態(tài)重構(gòu)等。例如,利用海森結(jié)構(gòu)光顯微鏡可實現(xiàn)線粒體的超快超分辨成像,解析線粒體融合、分裂時內(nèi)嵴的活動等。
細胞生理功能分析模塊:可用于觀察細胞的生理活動,如鈣離子信號傳導。一些熒光探針可隨細胞內(nèi)鈣離子濃度變化而發(fā)出不同強度的熒光,通過黃色光激發(fā)成像,能實時監(jiān)測鈣離子濃度動態(tài)變化,了解細胞的信號傳導過程。FV3000 系列共聚焦顯微鏡的共振掃描振鏡可每秒 438 幀速度捕獲鈣離子信號等關鍵的實時生物電生理現(xiàn)象。
細胞代謝分析模塊:借助特定的代謝標志物熒光探針,通過黃色光動態(tài)成像觀察其在細胞內(nèi)的分布和變化,分析細胞代謝活動。如觀察細胞對葡萄糖等營養(yǎng)物質(zhì)的攝取、代謝產(chǎn)物的生成等過程,了解細胞代謝狀態(tài)及其在不同生理或病理條件下的變化。
細胞遷移與侵襲分析模塊:在成像過程中,可追蹤細胞的運動軌跡,分析細胞遷移速度、方向以及遷移過程中的形態(tài)變化。對于腫瘤細胞,還可研究其侵襲能力,觀察腫瘤細胞如何穿過細胞外基質(zhì)等結(jié)構(gòu),為腫瘤轉(zhuǎn)移機制研究提供數(shù)據(jù)支持。
分子互作分析模塊:若采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)等技術(shù)標記細胞內(nèi)相互作用的分子,通過黃色光動態(tài)成像,可根據(jù)熒光信號的變化分析分子間的相互作用動態(tài)過程,了解蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì) - 核酸等分子互作在細胞生理活動中的作用。
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